10 20 30 40 50 60 70

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|

Zebrafish Fst1 MLRMLKRQQLHPGMILLLFWLCYLIEDQKVQA--GNCWLQ--QGKNGRCQVLYMPGMSREECCRSGR---

Common carp Fst1 ...... H...... L...... --...... --...... ---

Fathead minnow Fst 1 ...... H...... L...... --...... --...... ---

Goldfish Fst1 .Q...... L..SR.....L.....T...... --...... --...... ---

Atlantic salmon Fst1 .....QTL--Q...L...I...HFM...N...--...... --...... V...N...... ---

Rainbow trout Fst 1 .....QKLR.Q...S...I...HFM...... --...... --...... V...... ---

Tiger pufferfish Fst1 .FG...HH-....IL..FM...H.M.H.....--...... --...... ---

Green spotted pufferfish Fst1 .FG...HH-....VL.FFV...H.M.H.....--...... --...... ---

Striped seabass Fst1 .F....HH-....IF.FFI...H.M.H.....--...... --...... ---

Tilapia Fst1 .FG...HH-....IF..FL...H.M.H.....--...... --...... ---

Stickleback Fst1 .S....HH-....FL..FI...H.M.H.....--...... --...... S...... ---

Medaka Fst1 ---..NHH-....IF.FFM...H.M.H.....--...... --..R...... Q...K...... ---

Fathead minnow Fst2 ---..QLPR.RQ.V.A..I.FAH.M.Q.....--...... --...... S.....D...... ---

Zebrafish Fst2 ---.RQFP..RQ.VLA..I.FAH.M.E.....--...... --...... S.....D..K...---

White catfish Fst 2 ---..RFPS.------.VL..AHF.DEHR.Y.--....YE--...... M..LSE....D....E.---

Blue catfish Fst2 ---..RFPS.------.VL..AHF.DEHR.Y.--....YE--...... M..LSE....D....E.---

Channel catfish Fst2 ---..RFPS.------.VL..AHF.DEHR.Y.--....YE--...... M..LSE....D....E.---

Rabbit Fst1 ------

Dog Fst1 ---.VGPRHPPG.LC...LL..QFM..RNAHGKR.G.AARGGSAAA.ASYFSVGGAG.ALGTAAL..RWT

Pig Fst1 ---.VRPKHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Cow Fst1 ---.ARPRHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Hedgehog fst1 ------.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Rat Fst1 ---.VCARHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Mouse Fst1 ---.VCARHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Macaque Fst1 ---.VRARHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Human Fst1 ---.VRARHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Horse Fst1 ---.VRPRHQPG.LC...LL..QFM..RSA..--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Cat Fst1 ------.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Opossum Fst1 ---..NQRNQPG-.L...IL..Q.M..RT.L.--.....R--.A...... KTEL.K....ST..---

Platypus Fst1 ------PSA.--.....R--.A...... RTEL.KD...... ---

Chicken Fst1 ---..NQRIHPG-.LV..MF.YHFM..HTA..--.....R--.AR...... KTDL.K....K...---

Frog Fst1 ---..NERIQPGMIF..TVS..HFM.HRA...--...... --.S...... RTEL.K....KT..---

Lamprey Fst ---.SSQKVATVKVF.GA.LVFAF.ANHPAH.--...... --.S.....RE.LKMNV.QQ...... ---

80 90 100 110 120 130 140

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Zebrafish Fst1 -LGTS-WT-EEDVPNSTLFRWM-IFNGGAPNCIPCK-ETCDNVDCGPGKRCKMNRRSKPRCVCAPDCSNV

Common carp Fst1 -....-..-...... -...... -...... I

Fathead minnow Fst 1 -....-..-...... -...... -...... I

Goldfish Fst1 -....-..-...... -...... -...... K...... I

Atlantic salmon Fst1 -....-..-...... -...... -......

Rainbow trout Fst 1 -....-..-...... -...... -...... I......

Tiger pufferfish Fst1 -....-..-...... -...... -...... I

Green spotted pufferfish Fst1 -....-..-...... -.....L.--.AYL-A---K.E-----...... I

Striped seabass Fst1 -....-..-...... -...... -...... I

Tilapia Fst1 -....-..-...... -...... -...... K..L...... I

Stickleback Fst1 -....-..-...... -...... -.S...... T.I

Medaka Fst1 -....-..-...... K.I-...... -.S...... I

Fathead minnow Fst2 -...A-..-...... N.....L-...... -...... K.N......

Zebrafish Fst2 -...A-..-...... N.....L-...... -...... S...... K.N......

White catfish Fst 2 -..MA-..-.....SN.....L-LMH...... -...... K..L...N...... N

Blue catfish Fst2 -..MA-..-.....SN.....L-LMH...... -...... K..L...N...... N

Channel catfish Fst2 -..MA-..-.....SN.....L-LMH...... -...... K..L...N...... N

Rabbit Fst1 ------Q--IV---.--.S------..------.-.--.--.--

Dog Fst1 N.A.PG.SGVRRLKAV..WDRQPSLER.Y.--LKG.GK..E...... K.R..KKN...... I

Pig Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... S.....-...E...... K.R..KKN...... I

Cow Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Hedgehog fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Rat Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Mouse Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Macaque Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Human Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K.R..KKN...... I

Horse Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...... K.R..KKN...... I

Cat Fst1 -.S..-L.-....NDN...K..-...... ------.--R-----QT...... I

Opossum Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K....KKN...... I

Platypus Fst1 -.S..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K....KKN...... S.

Chicken Fst1 -.T..-..-....NDN...K..-...... -...E...... K....KKN...... I

Frog Fst1 -....-..-...... K..-..H....H.V...-...E...... K....KKN...... I

Lamprey Fst -..SA-Y.-G.Q.STA...... -A.S...... K...-...... Q.R.S..N...... A

150 160 170 180 190 200 210

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Zebrafish Fst1 TWKGPVCGSDGKTYRDECALLKSKCKGHPDLEVQYQGKCKKTCRDVLCPGSSTCVVDQTNNAYCVTCN-R

Common carp Fst1 ...... -.

Fathead minnow Fst 1 ...... -.

Goldfish Fst1 ....S...... A.H..M...... -.

Atlantic salmon Fst1 ...... K...... V.L...... M..-.

Rainbow trout Fst 1 ...... K...... V.L...... M..-.

Tiger pufferfish Fst1 ...... T.....K...... A...... D...... -.

Green spotted pufferfish Fst1 ...... T.....K...... A...... D...... -.

Striped seabass Fst1 ...... K...... A...... D...... -.

Tilapia Fst1 ...... K...... A...... D...... -.

Stickleback Fst1 ...... K...... A...... D...... -.

Medaka Fst1 ...... F.....K...... A..R.....D...... M..-.

Fathead minnow Fst2 .F...... N.....RA...R....TA...... S.Y..R...... L...... -.

Zebrafish Fst2 .F...... N.....RA...R....SA...... S.Y..R...... L...... -.

White catfish Fst 2 .L...... T...N....RRA..RRY.N.VA...... N..H.....S.....N...... E-.

Blue catfish Fst2 .F...... T...N....RRA..RRY.N.VA...... M.N..H.....S.....N...... E-.

Channel catfish Fst2 .L...... T...N....RRA..RRY.N.VA...... N..H.....S.....N.-...... E-.

Rabbit Fst1 ----A.--M...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Dog Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Pig Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Cow Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E.Q...... F...... -.

Hedgehog fst1 ...... M...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Rat Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Mouse Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Macaque Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... R...... F...... -.

Human Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... R...... F...... -.

Horse Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... N...... -.

Cat Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... F...... -.

Opossum Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... -.

Platypus Fst1 ...... L...... S...... AR..EQ.E...... R...... E...... -.

Chicken Fst1 ...... L...... N...... AR..EQ.E...... -.

Frog Fst1 ....S...I.....K...... A....V.E.D...... -.

Lamprey Fst S-RAS...T...... G.....AR...Q.N..M..H.P.Q.N.K..Q..SGTF.....N...H..L..L.

220 230 240 250 260 270 280

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Zebrafish Fst1 ICP-EV------MSPDQYLCGNDGIVYASACHLRRATCLLGRSIGVAYEGKCIK------

Common carp Fst1 ...-..------T...... ------

Fathead minnow Fst 1 ...-..------T...... ------

Goldfish Fst1 ...-..------T...S...... N...... ------

Atlantic salmon Fst1 ...-.Q------R....F...... I...... Q.....------

Rainbow trout Fst 1 ...-.Q------R....F...... I...... Q.....------

Tiger pufferfish Fst1 ...-..------T..EH...... I...... ------

Green spotted pufferfish Fst1 ...-..------T..E.H...... SSFFCPLTHFEKHNNP

Striped seabass Fst1 ...-..------T..E...... I...... ------

Tilapia Fst1 ...-..------T..E...... I...... ------

Stickleback Fst1 ...-..------T..E...... ------

Medaka Fst1 L..-.A------T..E...... I...... K...... K...... ------

Fathead minnow Fst2 L..-..------T..E...... NT...... IM...... ------

Zebrafish Fst2 F.T-..------T..E...... K...... IM...... D------

White catfish Fst 2 V..-..------T..E...... I...... I...... D------

Blue catfish Fst2 V..-..------T..E...... I...... I...... D------

Channel catfish Fst2 V..-..------T..E...... I...... I...... D------

Rabbit Fst1 ...-.P------T..E...... VT.P...... K...... L...... ------

Dog Fst1 M..-.P------T.SE...... VT.P...... K...... L...... ------

Pig Fst1 ...-.P------T.SG...... VT.S...... K...... L...... ------

Cow Fst1 ...-.P------T.SE...... VT.P...... K...... L...... ------

Hedgehog fst1 ...-.P------S.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Rat Fst1 ...-.P------S.SE.S...... VT.S...... K...... L...... ------

Mouse Fst1 ...-.P------S.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Macaque Fst1 ...-.P------T.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Human Fst1 ...-.P------A.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Horse Fst1 ...-.P------T.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Cat Fst1 ...-.P------T.SE...... VT.S...... K...... L...... ------

Opossum Fst1 ...-.P------T.SE...... T.S...... K...... L...... ------

Platypus Fst1 ...-DP------P..E...... RT.S...... K...... L...... ------

Chicken Fst1 ...-.P------T..E...... T...... K...... L...... ------

Frog Fst1 ...-.P------V...... T...... K...... L...... ------

Lamprey Fst P..A.SGQGEQQQQQQ.HV..K..VT...V...... K...... Q.R.S.------

290 300 310 320 330 340 350

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Zebrafish Fst1 ------AKSCDDIHCSAGKKCLWDSKMSRGRCAVCAESC-PESRSEEAVCASDNTTYPSE

Common carp Fst1 ------...... Q..V...... A..G....V..V...-......

Fathead minnow Fst 1 ------...... Q..------

Goldfish Fst1 ------....N.....V...... G...... M...-......

Atlantic salmon Fst1 ------....E..Q...... AR...... SL.E.A.-S...TG......

Rainbow trout Fst 1 ------..------

Tiger pufferfish Fst1 ------....E..Q...... AR...... SL.D.T.-....TD......

Green spotted pufferfish Fst1 PSERPHPSFVTSELPE....E..Q...... AR...... SL.E.T.-....TD......

Striped seabass Fst1 ------....E..Q..T...... AR...... SL.D.T.-....TD......

Tilapia Fst1 ------....E..Q...... AR.G....SL.D...-....TD......

Stickleback Fst1 ------....E..Q...... AR...... SM.G.T.-....TD......

Medaka Fst1 ------....E..Q..G...... R.G....SL.D...-Q...TD.S......

Fathead minnow Fst2 ------

Zebrafish Fst2 ------.R..K..N.RE.R.....KRTG...... EDT.-....PGDS...... D

White catfish Fst 2 ------.H.....R.PD...... MRTG....S..ESE.-...HPGDS...... A..R..

Blue catfish Fst2 ------.H..G..R.PD...... MRTG....S..ESE.-...HPGDS...... A..R..

Channel catfish Fst2 ------.H.....R.PD...... MRTG....S..ESE.-...HPGDS...... A..R..

Rabbit Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-.D.K.D.P...... A..A..

Dog Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-...K...P...... A..A..

Pig Fst1 ------....E..Q.TG...... F.AG....SL.D.L.-...K...P...... A..A..

Cow Fst1 ------...... Q.TG...... F.VG....SL.G.L.-...K...P...... A..A..

Hedgehog fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-..TK...P...... A..A..

Rat Fst1 ------....E..Q.GG...... F.VG....SL.D.L.-.D.K.D.P...... A..A..

Mouse Fst1 ------T...E..Q.GG...... VG....SL.D.L.-.D.K.D.P...... A..A..

Macaque Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-.D.K.D.P...... A..A..

Human Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-.D.K.D.P...... A..A..

Horse Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-.D.K...P...... A..A..

Cat Fst1 ------....E..Q.TG...... F.VG....SL.D.L.-...K...P...------

Opossum Fst1 ------....E.....G...... F.VG....LL.D.L.-...K.D...... A..A..

Platypus Fst1 ------....E..Q..G...... F.VG.....L.D.L.-.....D...... A.....

Chicken Fst1 ------....E..Q...... F.VG.....L.D.L.-...K.D......

Frog Fst1 ------....E..Q...... RVG.....L.DDV.GA..K.DDT......

Lamprey Fst ------S.....VL.GS...... PAEGGPH..Q.NDI.-RDAKRM.P...TN.N...NA

360 370 380 390 400

....|....|....|....|....|....|....|....|....|....|..

Zebrafish Fst1 CAMKQAACSLGVLLEVKHSGSCN--CK------

Common carp Fst1 ...... L....--..------

Fathead minnow Fst 1 ------

Goldfish Fst1 ...... --..------

Atlantic salmon Fst1 .V...T.....T...A...... --..------

Rainbow trout Fst 1 ------

Tiger pufferfish Fst1 ...... M.....I..A....--..------

Green spotted pufferfish Fst1 ...... A...... A....--..------

Striped seabass Fst1 ...... MR...... --..------

Tilapia Fst1 ...... M...... L....--..------

Stickleback Fst1 ...... A...A..L....SITEDQEVDEDDEDSDYMAYVHISSILDG

Medaka Fst1 ...... K...... P..SITEDQE--EDEEGEDYMAYVHLASVLDG

Fathead minnow Fst2 ------

Zebrafish Fst2 ...R....A..LV...... --SLSEETDEEEDDEDYTDYSHVSLLLTG

White catfish Fst 2 .E.HR....R.LV...... --..------

Blue catfish Fst2 .E.HR....R.LV...... --..------

Channel catfish Fst2 .E.HR....R.LV...... --S------

Rabbit Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Dog Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Pig Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Cow Fst1 ....E....S...... SISEDTEDEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Hedgehog fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Rat Fst1 ....E....S...... SISEETEEEEEEEDQDYS--FPISSTLEW

Mouse Fst1 ....E....S...... SISEETEEEEEEEDQDYS--FPISSILEW

Macaque Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Human Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Horse Fst1 ....E....S...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Cat Fst1 ------...... SISEDTEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Opossum Fst1 ....E....T..V...... ------

Platypus Fst1 ....E....S...... SINEDPEEEDEDEDQDYS--FPISSILEW

Chicken Fst1 ....E....M...... SINEDPEEEEEDEDQDYS--FPISSILEW

Frog Fst1 ...... T...... --..------

Lamprey Fst ...GN....S..Y.....T.Y.SAISEEEEEDSDDVDMNT---FPKPIFHNW